地點(diǎn)：安徽省疾病預防控制中心毒理科病媒生物檢測實(shí)驗　　

　　背景：鼠類(lèi)不僅傳播鼠疫、流行性出血熱、鉤端螺旋體病、斑疹傷寒等多種疾病，嚴重危害人類(lèi)健康;而且通過(guò)嚙咬、盜食、污染等方式給工業(yè)、農牧業(yè)生產(chǎn)等造成直接或間接的經(jīng)濟損失。在此背景下，通過(guò)深入細致的調研工作，了解鼠類(lèi)防制技術(shù)規范的現狀，并在遵循相關(guān)國家、行業(yè)標準的基礎上，編制符合深圳市特點(diǎn)的鼠類(lèi)防制技術(shù)規范，有助于安全、有效地預防和控制鼠類(lèi)，保護人民群眾身體健康和生 命安全，提升安徽省的環(huán)境衛生水平?！　?/p>

一、材料和方法：　

　　樣品來(lái)源于居民區及收治醫院周 圍 環(huán) 境 采 集 目 標 病 媒 生 物。160份鼠肺樣品來(lái)自本地，15份蜚蠊體表擦拭子來(lái)自安徽等地。所有樣品均凍存于-80度待檢?！　?/p>

二、儀器及試劑：　　

　　1、浙江優(yōu)嘉全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀　　

　　2、熒光定量PCR分析儀　　

　　3、高效病毒濃縮試劑盒　　

　　4、巢式RT-PCR所采用的引物，一步法RT-PCR試劑盒　　

　　5、RNA提取試劑盒

　　樣品RNA的提取別取待檢鼠肺組織于全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀充分再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于負20度保存備用，蜚蠊體表擦拭子中加入無(wú)菌生理鹽水少許于4度中過(guò)夜，擠壓后取出棉拭子，將剩余液體10000r/min離心5min，其上清液則用高效病毒濃縮試劑盒進(jìn)行濃縮，濃縮所得的晶體中再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于負20度保存備用，按照試劑盒的說(shuō)明 從樣品的異硫酸氰胍溶液中提取提取所得的RNA于負20度中保存備用?！　?/p>

實(shí)驗步驟：　　

　　1、準備全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀?！?/p>

　　2、金屬適配器，以及鋼珠適配器?！　?/p>

　　3、將老鼠組織剪碎，放入研磨管，加入鋼珠?！　?/p>

　　4、將適配器裝入研磨儀中，開(kāi)啟低溫功能保持溫度?！　?/p>

　　5、設定參數，啟動(dòng)儀器至研磨程序結束，可得到如圖所示樣品。

儀器介紹：

　　全自動(dòng)樣品冷凍研磨儀：一種快速、高效、制冷的研磨系統。它能在非常短的時(shí)間內將土壤、植物和動(dòng)物的組織/器官、細菌、酵母、真菌、孢子、古生物標本等樣品完成研磨、粉碎、混合機細胞破壁。廣泛應用于生命科學(xué)、醫藥、生化、環(huán)境、地質(zhì)、農業(yè)、林業(yè)、質(zhì)檢、材料等領(lǐng)域?！　?/p>

優(yōu)勢：　　

　　研磨效果具有高度可重現性、觸屏操作，可存儲10條參數、能夠有效抑制核酸降解，保留蛋白質(zhì)活性、研磨時(shí)處于全封閉狀態(tài)，無(wú)交叉污染，低噪音、可輕松處理高韌塑料、高強塑料、樹(shù)脂等難研磨樣品、具備安全罩及安全鎖，無(wú)需涉及液氮操作，安全性高。